標簽: 甲基化 特異性 PCR
DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉變為5-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是**存在的化學性修飾堿基。
DNA
亞硫酸氫鈉、氫醌、石蠟油、乙醇
水浴鍋、PCR儀
1. 在50 μl 體系中,DNA(2~5 μg)經NaOH(終濃度值0.2 mol/L)在37℃變性10 Min。 2. 對于ng級別的人基因組DNA,在進行修飾前加入2μg蛙魚精DNA為載體。
3. 加入30 μl 剛配制好的10 mmo/L 氫醌與520/1的40.5%亞硫酸氫鈉混勻。 4. 然后用石蠟油隔絕空氣的條件下,避光在50%溫育16 h。
5. 修飾后的DNA過WizerdDNA純化柱,用50/1 L 水洗脫。 6. 室溫下用NaOH(終濃度為0.3 mol/L)修飾5 min,之后用乙醇沉淀。
7. DNA溶于20 μl 水中,立即使用或在-20℃保存。
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